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  • 細胞污染防治的一些建議
  • 2019-12-11 9:16:06
  •   無論新人還是熟手,細胞污染都是必須要面對的,那對于細胞污染,我覺得zui好的措施就是預防為主,因為細胞一旦污染,想救是非常困難的,即便救活,細胞狀態也會差很多。所以我先來說下我是怎么預防細胞污染的。

          生物安全柜是處理細胞的主要場所,也是細胞發生污染的主要場所,所以安全柜的正確使用是預防細胞污染的di一步。那么安全柜內需要注意的小細節有哪些呢?

           首先,所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手,只要出了安全柜,再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實驗耗材盡量放置在合適的容器內用報紙包好后滅菌,如*頭插入*頭盒,其他不規則的耗材可放入鋁制飯盒內。*頭插入*頭盒時要帶手套,因為滅菌可能無法去除*頭上可能粘附的油脂或其他雜質。

           其次,安全柜內的東西要擺放有序,這個可以根據個人使用習慣而定(如果站友使用的是公用安全柜,則可能需要使用前臨時調整),以我為例,移液器和*頭盒(各種規格備齊)放右邊,實驗中需要使用的試劑放右前方,廢液缸放左前方,并保證和試劑有一定安全距離,右角放置培養皿,左角放置其他耗材(如試管等),盡量保證常用的東西放右手邊(左撇站友相反),次常用的東西放左手邊(左撇站友相反),右邊操作區域為潔凈區,左邊為非潔凈區(如廢液缸和其他用剩材料)。

           再次,由于使用安全柜的過程中手和前臂都是要進入安全柜的,所以有條件的站友應該準備至少一件細胞房專用連體潔凈服(裝入布袋消毒后烘干,在細胞房中取出,非geng換前不得穿出細胞房),沒有條件的站友則至少準備一副套袖,每次用完后放安全柜中紫外消毒。

           在準備工作一切就緒后,細胞的處理過程也是大家需要注意的。細胞處理前應將當次實驗需要的各種試劑、耗材準備齊備,盡量減少細胞處理過程中的來回走動。安全柜使用前zui好紫外照射30min滅菌,然后通風5min保證換氣到位。實驗過程中,所有試劑zui好不用就蓋上瓶蓋,如果需要打開瓶蓋,則除了干凈的*頭,其他任何東西都不要從瓶口的正上方經過,防止試劑污染。細胞培養若使用培養皿,則zui好不要長時間打開皿蓋。另外移液器也是細胞污染的一個隱藏途徑,特別是使用無濾芯*頭的站友,在吸取試劑時,很容易不小心將試劑倒吸入移液器,如果發生這種情況,要及時用酒精棉球擦去倒吸的試劑,特別是培養基,極易成為細菌生長的溫床。一把污染的移液器可以輕松污染站友的所有細胞,甚至整個實驗室的細胞,所以友情推薦有條件的站友在處理細胞時一定要使用帶濾芯的*頭。當然即便是使用帶濾芯的*頭,也要盡量避免試劑倒吸,因為想要徹底去除倒吸入移液器的試劑非常困難。

           培養箱作為細胞培養的場所,也需要站友留心。由于培養箱內的溫度和濕度很高,是很適宜細菌生長的,所以如果有條件(實驗室有2個或以上培養箱),zui好定期用75%酒精擦拭培養箱,及時定期geng換培養箱內水槽。

           那么細胞如果還是不幸污染了,那又該怎么辦呢?我把細胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細胞狀態變差,但依舊能保持生長,顯微鏡下(光鏡)不可見明顯微生物或可見少量微生物,這時候我們在換液時建議多用PBS洗幾次,然后用雙抗原液侵潤細胞1-2min,吸去,再加入正常培養基。早期污染只要發現及時,處理得當,救回來的可能性還是很大的。晚期污染則是細胞形態發生明顯改變,細胞停止生長,顯微鏡下可見明顯微生物。這時候我建議大家及時清理掉相關細胞,以免污染其他細胞,重新復蘇geng早批次的細胞。所以大家會發現,新細胞收到后,不應急于開展實驗,而應該先小心培養,凍存1到2個批次的早期細胞,然后再開展實驗,這樣實驗細胞一旦出現問題,可以有庫存細胞保證實驗還能繼續進行。

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