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納米長PCR試劑盒
產品貨號:NHS21-1產品品牌:戶實
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產品名稱納米長PCR試劑盒            

產品目錄號NHS21-1

產品說明本試劑盒適用于長PCR擴增(20kb)。產品定位于解決目前市場上難于擴增的若干PCR反應。納米PCR是納米材料輔助的基因擴增技術,研究表明某些納米材料可以增強基因擴增的總效率。

納米長PCR試劑盒25ul/100 配置如下:

4×NanoPCR buffer 1 (800ul,已包含dNTPsMg2+);

4×NanoPCR buffer 2 (800ul,已包含dNTPsMg2+);

4×NanoPCR buffer 3 (800ul,已包含dNTPsMg2+);

MgCl2 (25 mM) (500ul);

LPCR enzyme Mix (5 U/ul) (40ul)

納米長PCR試劑盒使用建議

  • 本試劑盒配備了三種PCR buffer,建議同時嘗試三種buffer,一開始不用額外添加MgCl2。選擇zui適合的引物和buffer進行后續試驗操作。納米材料容易團聚,每次使用前請輕輕搖勻后使用。PCR產物中含有的納米材料一般不影響電泳等后續操作。
  • PCR反應體系中各參數加量參考如下:

   

試劑

一般終濃度

建議用量

50ul

25ul

12ul

Sterilized ddH2O

 

補齊50ul

補齊25ul

補齊12ul

4×PCR buffer

1×

12.5ul

6.25ul

3.0ul

Primer 1(2 uM)

0.1~1uM

6.0ul

3.8ul

1.9ul

Primer 2(2 uM)

0.1~1uM

6.0ul

3.8ul

1.9ul

Template DNA (0.1ug/ul)

10pg~1ug

1.0ul

0.4ul

0.2ul

LPCR enzyme Mix (5 U/ul)

1~3U/50ul

0.6ul

0.4ul

0.2ul

MgCl2(25mM)

可根據情況自行確定添加量,一般不用即可

建議使用2步法擴增長PCR。一個典型的長PCR反應程序(舉例:從Lambda DNA擴增一個12-18kbDNA片斷)如下:[92-2min];[92-20s,65-6min]×30 cycles;[72-10min](循環數可按照PCR產物的多少適當調節). 如果不確定zui佳退火/延伸溫度,可以先做梯度PCR確定zui佳退火/延伸溫度[65-69]。退火/延伸時間可以依據目標長度來調節,一般在2-10分鐘。

  • 批量PCR需要計算好實驗中所需要的mix總量以及需要單獨加入PCR體系中的成分和量。例:做以不同基因組為模板的912ul體系的PCR。計入加樣損耗,按10管加量計算。試驗操作全過程建議在冰盒上進行。

 

mix做好,上下反復震蕩15-20下后再渦旋震蕩5秒,離心(大約待離心機轉到7000rpm停下)。向每個PCR管加入mix并用槍頭混合3下使均勻。放入PCR儀進行擴增。比較容易出現的問題是mix混合不均勻。

參考文獻

Haikuo Li et al.  Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545

保存溫度-20

保質期12個月

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qq:869248833                

納米長PCR試劑盒納米材料與DNA結合的若干基礎研究國外做得比較多,目前利用納米材料的獨特的催化性能或與諸多分子(蛋白質、核酸,有機小分子等)的結合性能國內外正在開展大量的應用技術研究,國內的若干研究室已經做出了出色的工作。但是納米材料能夠在一般基因擴增技術無能為力或效率不高的情況下擴增出來目的DNA,并且明顯增加了擴增專一性和靈敏度,是在國際上首次發現。目前我們是納米基因擴增技術研究的ling先者之一。由于基因擴增技術屬于上百個DNA技術中的主要技術環節,一旦它具備了把絕大部分現行PCR技術升級換代的優勢,它將進入核酸試劑巨大的國際市場,應用價值相當可觀。通過本研究我們應該比較清楚納米材料催化基因擴增的若干機制,極有可能在此基礎上研制出更好的基因操作技術。

 

我們在研究納米PCR機制的基礎上,重點加強納米基因擴增技術在完整基因擴增中的應用,使用上述三個指標(特異性、靈敏度以及穩定性)來衡量納米基因擴增技術以及它與其他分子生物學技術相結合的組合技術,能否解決不同長度的基因組完整基因序列在擴增時同樣面臨的這三個問題。我們還將直接使用血液和尿液作為基因組DNA的存在條件來考察納米PCR與一般PCR在上述指標上的比較研究。 另外,由于基因組技術(不是一般意義上的基因技術)越來越重要,研究基因時不能像以前一般主要注意基因所轉錄出來的mRNAmRNA對應的cDNA,包含基因內所有調控等信息的DNA 片段越來越多地被研究,它們需要在一起被擴增,即完整基因的擴增將愈發重要。當然基因間的非編碼區序列被認為甚至更重要,它們也越來越多地需要被擴增出來加以研究. 初步研究表明納米基因擴增技術在擴增10-15kb長度的長片段DNA時比一般PCR技術有明顯優勢。我們正在設計人類基因組第21號染色體上全部基因(533個)的對比擴增實驗,先擴增幾十個基因,從統計上確立納米基因擴增在基因組中完整基因大規模擴增的技術優勢;在上述研究基礎上建立初步通用的完整基因擴增方案。通過上述研究,希望納米基因擴增技術能夠成為解決生物醫學研究和應用領域中基因擴增之特異性、高靈敏度和穩定性(或三個指標之一)等重大問題的關鍵技術。

基因擴增技術發明了二十多年,直到2004年過期,其技術水平也沒有達到對擴增結果的可預測程度。但是PCR技術體系并不能被認為是很復雜的反應體系,至少其組成就是DNA模板、引物、聚合酶、dNTPs及緩沖系統,不能算是很復雜的體系。 我們認為應該可以實現擴增結果的可預測性。目前的PCR引物設計軟件已經比較成熟。我們選取PRIMER3.1 進行設計,利用TAQ酶和PFU酶系統一次擴增一批序列,把實驗結果分為一次擴增成功和一次擴增失敗。國內外每天應用PCR技術的實驗室何止成千上萬,如果PCR技術可以預測結果,將節約大量實驗成本并開辟一個巨大的市場。

 

納米PCR產品可以作為現有市場PCR產品的有利補充,廣大的PCR試劑使用者手上將陸續又多出一批增加基因擴增成功率的好幫手。今后幾年內研制出來一批既有自主知識產權又有實用價值的納米PCR試劑盒,推動納米生物技術的應用發展。

本產品的詳細屬性請參考說明書,或至官網下載,祝您實驗順利?。?!

戶實生物經過不斷的實驗優化和改進,積累了大量的經驗,擁有專業的戶實研發團隊。利用專業的戶實免疫技術自主研發的elisa試劑盒,能對血清及其它樣本定量檢測抗原,定性檢測特異性抗體。優質的試劑,先進的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩定性、重復性和可靠性方面都具有很大的優勢。

ELISA檢測技術服務內容: 
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術進行樣本檢測。

二、樣本要求
在收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,請造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質量,所以避免反復凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項請與我司技術人員溝通。

液體類標本:標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。

血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

血漿:應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.0-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

三、寄標本時需注明以下情況:
1、標本編號;2、所測項目;3、是否做復孔;3、聯系方式;4、實驗后標本是否寄回。

客戶須知:
客戶應對所提供的材料及信息負責,如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

 

上海戶實醫藥科技有限有一批專業的技術人員,長期致力于解決產品在實驗中出現的各種問題和突發狀況,并及時高效的提高相對的解決方案。如您在實驗中出現任何問題和疑惑,請與我司技術人員聯系,021-58958113/18916004157