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高GC納米PCR試劑盒
產品貨號:NHS21-5產品品牌:戶實
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GC納米PCR試劑盒

產品目錄號NHS21-5

GC納米PCR試劑盒產品說明:本試劑盒既適用于高GC序列的擴增,也適用于一般PCR擴增。產品定位于解決目前市場上難于擴增的若干PCR反應。納米PCR是納米材料輔助的基因擴增技術,研究表明某些納米材料可以增強基因擴增的總體效率。

GC納米PCR試劑盒25ul/250   配置如下:

2×NanoPCR buffer 11-1 (1000ul);

2×NanoPCR buffer 11-2 (1000ul);

2×NanoPCR buffer 11-3 (1000ul);

dNTPs (2.5mM)(300ul);

MgCl2 (25 mM) (500ul);

Taq DNA polymerase (5 U/ul) (60ul)

使用建議:

  • 納米材料容易聚集,每次使用前請震蕩均勻再使用。PCR產物中含有的納米材料一般不影響電泳等后續操作。
  • 一個典型的PCR反應(舉例:擴增一個高GC片段780bp)設計如下:

 

 

12ul反應

25ul反應

2×NanoPCR buffer-11

6.0 ul

12.0ul

dNTPs (2.5 mM)

1.0 ul

2.0ul

MgCl2 (25 mM)

1.2 ul

2.5ul

Primer 1(2 uM)

0.8 ul

1.6ul

Primer 2(2 uM)

0.8 ul

1.6ul

Template DNA (~10 ng/ul)

0.2 ul

0.4ul

Taq DNA polymerase (5 U/ul)

0.2 ul

0.4ul

ddH2O

1.8 ul

4.5ul

PCR程序舉例:[94-5min];[94-30s,56-30s,72-40s]×35 cycles(循環數可按照PCR產物的多少適當調節);[72-5min]. 如果不確定zui佳退火溫度,可以先做梯度PCR確定zui佳退火溫度。

  • 批量PCR需要計算并規劃好實驗中所需要混合的mix總量以及需要單獨加入PCR體系中的成分和加量。例:做以不同基因組為模板的912ul體系的PCR。計入加樣損耗,按10管加量計算。試驗操作全過程建議在冰盒上進行。

 

12ul反應

 

2×NanoPCR buffer-11

6.0 ul

×10=60

dNTPs (2.5 mM)

1.0 ul

×10=6

MgCl2 (25 mM)

1.2 ul

×10=12

Primer 1(2 uM)

0.8 ul

×10=8

Primer 2(2 uM)

0.8 ul

×10=8

Template DNA (~10 ng/ul)

0.2 ul

單獨添加

Taq DNA polymerase (5 U/ul)

0.2 ul

×10=2

ddH2O

1.8 ul

×10=18

 

按照上表所描述的將mix做好,并反復搖晃15-20下、上下振蕩后離心(大約待離心機轉到7000rpm隨即停下來就好),離心后,用槍頭分別加入相應基因組0.2ulPCR管內,每管11.8ul并用槍頭順便混合3下使均勻。放入PCR儀進行PCR。

 

實驗舉例1擴增以人類基因組為模板的38對序列引物。該38對高GC擴增產物GC>60%,大小均在700-800bp左右。38對退火溫度基本一致。使用上述12ul擴增體系, 使用NanoPCR試劑盒進行擴增的圖片如圖1所示。

說明: 高GC-38自己的產品圖片可以用

1 使用NanoPCR試劑盒擴增人類基因組38對引物的電泳圖片

Marker為λ/Hind .

 

說明: 高GC-1

2 使用國外某公司高GC試劑盒擴增人類基因組38對引物的電泳圖片

 

說明: 高GC-2

 使用國內某公司高GC試劑盒擴增人類基因組38對引物的電泳圖片

 

參考文獻

Haikuo Li etal.  Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706

Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545

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戶實生物經過不斷的實驗優化和改進,積累了大量的經驗,擁有專業的戶實研發團隊。利用專業的戶實免疫技術自主研發的elisa試劑盒,能對血清及其它樣本定量檢測抗原,定性檢測特異性抗體。優質的試劑,先進的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩定性、重復性和可靠性方面都具有很大的優勢。

ELISA檢測技術服務內容: 
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術進行樣本檢測。

二、樣本要求
在收集標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。我們提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,請造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質量,所以避免反復凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書,具體操作注意事項請與我司技術人員溝通。

液體類標本:標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。

血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

血漿:應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.0-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

三、寄標本時需注明以下情況:
1、標本編號;2、所測項目;3、是否做復孔;3、聯系方式;4、實驗后標本是否寄回。

客戶須知:
客戶應對所提供的材料及信息負責,如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。

 

上海戶實醫藥科技有限有一批專業的技術人員,長期致力于解決產品在實驗中出現的各種問題和突發狀況,并及時高效的提高相對的解決方案。如您在實驗中出現任何問題和疑惑,請與我司技術人員聯系,021-58958113/18916004157